便携式叶绿素测定仪对样本检测的应急预案

    对叶绿素的研究一直是人们极其关注的课题。叶绿素含量测定方法主要有分光光度法和活体叶绿素仪法两大类,后来又发展了光声光谱法。但是,用手持叶绿素仪或光谱分析仪测得的是色素相对含量指标,并且不同种类植物叶片中的色素指标与实际叶绿素含量之间的关系方程式不同,即不能用一种关系来转换不同植物的色素含量。在日常实验中普遍采用分光光度法,用的较多的是Arnon法。Arnon法需要把植物材料研磨,经过过滤或离心长,在操除渣、移液、定容、比色等过程,工作量大,提取时间作过程中误差较大,且易受光氧化的破坏,不适于对田间大量样品的测定和大量叶绿素的提取,并且也不适合大批量样本的应急检测。后来又提出了丙酮乙醇混合液浸提法,证明利用混合液进行叶绿素浸提的可行性。进一步研究后发现,混合液法比传统Arnon法提取叶绿素效率高,稳定性好。
    选材：剪取叶片,洗净后弃除叶柄和中脉,然后用纱布或吸水纸将叶片表面的水分吸干。为了试验的精确度更高,我们在取样时仅取每片叶的中间部位,并用SPAD-502测定其叶绿素相对含量值,使其偏差保持在(-5,+5)之间,超出范围者弃掉。把挑选的叶片剪成小于2mm碎条,混匀。分两份,一份在室温(25℃)下,立即用研磨法(80%丙酮,95%乙醇)和直接浸提法(8种提取液)提取叶绿素;另一份每次用千分之一天平精准称取(200 mg,称取24份;1 g,称取6份),分别装袋,密封好,储放到冰箱中备用。为增加不同测定方法之间可比性,样品在冷冻前称量分装好。
    浸提法:分别于容量瓶中加入15mL提取液,把叶片剪成宽度小于2mm的细丝或小块,混匀,分别准确称取200mg放入盛有提取液的容量瓶中,封口,置于黑暗条件下直接浸提。研磨法每个处理重复3次。室温试验时,按8种提取液分8组,每组12个50mL的容量瓶,分别按照上述方法加入叶片和各浸提液,并计时,在室温黑暗条件下直接浸提叶绿素,并不时摇动。分别于10h、13h、16h和48h时,每组各取出3个容量瓶,定容至50mL后在645nm和663nm波长下测定吸光度值。取出冷冻20h的叶片按照如上方法和程序或研磨或浸提。每个处理3个重复,浸提在50℃水浴中进行,用肉眼观察叶组织完全变白,即说明浸提完全,取出冷却后定容,在645 nm和663 nm波长下测定吸光度值。
    叶绿素仪：现在市面上最流行的莫过于SPAD502。SPAD502是有日本柯尼卡美能达研制生产的，SPAD502通过测量叶子对两个波长段里的吸收率，来评估当前叶子中的叶绿素的相对含量。该仪器拥有小巧的机身，仅200g的重量，可以方便地装入口袋并带到现场进行测量，因此又叫做手持叶绿素仪。叶绿素仪操作也非常方便，你只需将叶片插入并合上测量探头即可，无需将叶片剪下，这样就可以在作物的生长过程中全程对特定的叶片进行监测，从而得到更科学的分析结果。因此，叶绿素能够对叶片进行无损测定，保护了叶片本身。
    这两种方法各有优势，浸提法提取时受很多试剂的影响，因此在使用试剂时一定要谨慎，另外，浸提法测定时如果采用冷冻处理，可以缩短浸提时间，但是其测定值会变低。而用SPAD502测定则操作简单，结果精确，但是该仪器价格昂贵。因此我们要根据实际需求，来选择测定方法。

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