便携式叶绿素测定仪对多种叶绿素的提取

    叶绿素的提取: 将材料去脉剪碎(约1—2mm 见方) , 随机取样, 准确称重取015g (精确到0.1mg) , 放入50mL 比色管中, 分别加入上述三种提取液25mL; 另称0.5g 样品, 加6mL 双蒸水和少量CaCO3, 匀浆, 定容至25mL , 过滤, 取2.25mL 滤液放入50mL 比色管中, 加23.75mL 丙酮2乙醇(2∶1) , 使之成为95% 丙酮2乙醇匀桨提取液。比色管加塞放置于25℃生化培养箱内暗中提取叶绿素。每种提取方法重复3 次。
    叶绿素提取液吸收光谱的测定: 用分光光度计在600—700nm 范围内对不同叶绿素提取液进行扫描, 波长精度为0.2nm。
    叶绿素含量测定: 分别以提取溶剂作空白, 测定叶绿素提取液吸光度A 645、A 663, 利用A rnon 公式:
    叶绿素a 浓度(mg?L ) : Ca= 12. 7A 663- 2. 69A 645;
    叶绿素b 浓度(mg?L ) : Cb= 22. 9A 645- 4. 68A 663;
    叶绿素总浓度(mg?L ) : Ca+ b= Ca+ Cb。
    计算提取液中叶绿素浓度, 换算为每克鲜叶叶绿素含量(mg?g 鲜重)。
    　结果与讨论
    1　叶绿素提取液的吸收光谱
     种叶绿素提取液的吸收光谱在600—700nm 范围内基本相似(图1) , 说明4 种叶绿素提取液的光吸收性质基本相似, 可以用A rnon 公式进行叶绿素含量的计算。
    2　不同提取溶剂对叶绿素提取总量的影响
    不同提取溶剂对叶绿素提取总量有着明显的影响(表1) , 95% 丙酮2乙醇提取的叶绿素总量最高, 高于传统的80% 丙酮提取法29.5% ,95% 乙醇提取的叶绿素总量亦比80% 丙酮法高9.5%。95% 丙酮2乙醇提取叶片匀浆的叶绿素总量与提取叶片碎片的叶绿素总量没有显著差异。
    3　不同提取溶剂提取叶绿素的进程
    不同提取溶剂提取叶绿素速度差异较大, 提取完全程度也不同(表1)。提取速度最快的是95%丙酮2乙醇, 叶绿素经过8h 已经基本提取完全, 叶片碎片变白; 其次是95% 乙醇, 而80% 丙酮提取速度最慢, 后两者在24h 内没有完全提取出叶绿素。从提取速度来看, 95% 丙酮2乙醇要优于95%乙醇和80% 丙酮。叶片匀浆后用95% 丙酮2乙醇在015h 就已经提取完全, 大大加快了叶绿素提取速度。

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