奥林巴斯显微镜对中目的:确保光源、聚光镜和物镜光轴共线,避免亮度不均、成像偏移或杂散光干扰,是获得高质量图像的基础。
准备工作:
- 开机预热光源10分钟,使灯丝稳定。
- 放置样本玻片,使用10×物镜聚焦清晰。
- 缩小视场光阑和孔径光阑至最小状态。
校准步骤:
1. 光源灯丝对中
- 拔掉聚光镜上方滤色片,在载物台放置白色卡片。
- 调节灯座对中螺丝(通常位于灯箱后方),使卡片上灯丝像呈清晰对称椭圆形,并居中于圆形光斑。部分型号(如BX系列)可通过专用对中望远镜插入物镜转盘孔观察。
2. 视场光阑对中
- 打开视场光阑,在目镜中可见多边形亮区。
- 调节聚光镜对中螺丝(位于聚光镜支架两侧),使光阑边缘与视场圆重合。
- 缓慢扩大光阑至略超出视场,确保照明区域均匀覆盖。
3. 聚光镜孔径调节
- 拔出目镜,插入伯特兰透镜(或使用相衬望远镜)观察物镜后焦面。
- 调节孔径光阑至物镜NA值的70%~80%(如NA 0.25物镜对应光阑直径约70%)。
- 若无伯特兰透镜,可移开目镜直接观察光阑在物镜出瞳处的同心圆像。
4. 齐焦与共轴检查
- 旋转物镜转盘切换不同倍数物镜,检查是否保持粗略齐焦。
- 高倍镜(如40×)下微调聚光镜高度,使样本边缘出现科勒照明特有的清晰光阑像。
注意事项:
- 奥林巴斯显微镜需单独对中汞灯弧光,使用中心透镜调节光斑至标本平面居中。
- 定期清洁光路接口(如物镜螺纹、聚光镜上透镜),灰尘会导致对中偏移。
- 若更换灯泡或拆卸聚光镜,需重新执行全套校准。
简易验证:
使用均匀染色样本(如血涂片),低倍镜下整体亮度应一致;高倍镜下拍摄图像,灰度分析不应出现梯度差异。此校准流程适用于日常维护,若涉及激光共聚焦等复杂系统,建议由奥林巴斯显微镜工程师使用专业工具调整。
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